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檢測領域:

成分分析,配方還原,食品檢測,藥品檢測,化妝品檢測,環境檢測,性能檢測,耐熱性檢測,安全性能檢測,水質檢測,氣體檢測,工業問題診斷,未知成分分析,塑料檢測,橡膠檢測,金屬元素檢測,礦石檢測,有毒有害檢測,土壤檢測,msds報告編寫等。

香囊霉菌實時PCR定量檢測

發布時間:2025-07-09

關鍵詞:香囊霉菌實時PCR定量測試方法,香囊霉菌實時PCR定量測試案例,香囊霉菌實時PCR定量測試周期

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來源:北京中科光析科學技術研究所

文章簡介:

本檢測采用實時熒光定量PCR技術,針對香囊制品中的霉菌污染建立快速定量分析方法。重點覆蓋DNA提取效率、引物探針特異性驗證、標準曲線建立等核心環節,可精確定量曲霉屬、青霉屬等12種常見致霉微生物,檢測限達10CFU/g,滿足《化妝品安全技術規范》對微生物限值的要求。
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因業務調整,部分個人測試暫不接受委托,望見諒。

檢測項目

總霉菌定量檢測:通過18S rRNA通用引物測定樣品中所有霉菌屬總量,定量范圍10?~10?拷貝/μL,RSD≤5%

曲霉屬特異性檢測:針對β-tubulin基因設計探針,可識別黃曲霉、黑曲霉等7種致病曲霉,檢出限15CFU/g

青霉屬特異性檢測:基于calmodulin基因標記,定量產黃青霉、橘青霉等5種常見污染菌,線性范圍101~10?CFU/mL

鐮刀菌定量分析:靶向EF-1α基因,檢測禾谷鐮刀菌等3種產毒菌株,擴增效率90~110%

DNA提取效率驗證:采用內標質控法監測提取回收率,要求≥85%

PCR抑制物檢測:添加外源Internal Amplification Control,CT值偏移≤1.5

引物探針特異性驗證:通過BLAST比對確保無交叉反應,非目標菌株擴增陰性

標準曲線建立:采用10倍梯度稀釋標準品(102~10?拷貝數),R2≥0.99

擴增效率驗證:斜率-3.1~-3.6,對應效率90~110%

重復性驗證:同批次檢測CV≤7%,批間CV≤10%

陽性對照設置:含103CFU/mL標準菌株ATCC15517

陰性對照設置:無模板對照及無引物對照

檢測范圍

草本填充型香囊:艾葉、薄荷、薰衣草等植物原料制品,檢測含水量>12%時的霉變風險

合成纖維香囊:滌綸/氨綸材質掛飾,檢測表面微生物定植量

精油浸漬型香囊:玫瑰精油、檀香精油載體,檢測有機溶劑對PCR的影響

車載懸掛香囊:檢測高溫環境下(60℃)的霉菌孢子存活率

衣柜防霉香囊:檢測萜烯類物質存在時的微生物抑制效果

中藥材配伍香囊:檢測陳皮、蒼術等易霉變藥材的污染閾值

納米緩釋香囊:檢測二氧化鈦載體表面微生物吸附量

兒童驅蚊香囊:檢測檸檬桉油等成分對PCR擴增的干擾

硅膠干燥型香囊:檢測吸濕后(RH>65%)的霉變臨界點

香薰石膏香囊:檢測多孔材料內部的微生物滲透深度

真絲刺繡香囊:檢測蛋白質纖維的生物降解污染

可降解環保香囊:檢測PLA/PBAT材料表面菌膜形成量

檢測標準

ISO 21527-1:2008 食品和動物飼料微生物學-酵母和霉菌計數

GB/T 39999-2021 紡織品 防霉性能的評價

ISO 18416:2015 化妝品微生物學-白色念珠菌檢測

GB/T 38086-2019 生物產品中真菌毒素測定通用要求

USP 2022 通則 1112 非無菌產品的微生物檢查

ISO 22117:2019 食物鏈微生物學-定量檢測的實驗室要求

GB/T 37223-2018 香料和香精 微生物限量

EP 10.0 2.6.12 非無菌產品微生物檢查

ISO 16212:2017 化妝品微生物學-酵母和霉菌計數

GB/T 38483-2020 微生物源抗菌物質抗霉菌活性測定

檢測儀器

實時熒光定量PCR儀:采用TaqMan探針法執行40循環擴增,溫度均一性±0.3℃,支持FAM/HEX/VIC多通道檢測

冷凍研磨儀:在液氮環境(-196℃)下破碎植物纖維組織,粒徑處理至100μm,確保DNA釋放效率

核酸自動提取儀:磁珠法純化DNA,內置蛋白酶K消化模塊,消除多糖多酚抑制物

超微量分光光度計:檢測DNA純度(A260/A280=1.8±0.2),靈敏度0.2ng/μL

生物安全柜:提供ISO 5級潔凈環境,防止氣溶膠污染

恒溫混勻儀:控制裂解溫度(65±1℃),振蕩頻率2000rpm加速細胞壁破碎

梯度PCR儀:優化退火溫度(55~65℃),確定最佳引物結合條件

微孔板離心機:30秒內完成96孔板離心,去除反應體系氣泡

電化學工作站:檢測PCR反應中氧化還原信號,實時監控擴增異常

恒溫恒濕培養箱:模擬香囊存儲環境(30℃, RH85%),加速霉菌生長

檢測流程

1、咨詢:提品資料(說明書、規格書等)

2、確認檢測用途及項目要求

3、填寫檢測申請表(含公司信息及產品必要信息)

4、按要求寄送樣品(部分可上門取樣/檢測)

5、收到樣品,安排費用后進行樣品檢測

6、檢測出相關數據,編寫報告草件,確認信息是否無誤

7、確認完畢后出具報告正式件

8、寄送報告原件

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